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Elisa檢測之組織樣本的處理方法

 更新時(shí)間:2024-10-21 點(diǎn)擊量:99

Elisa是一種快速、靈敏、準(zhǔn)確可靠的定性定量分析方法。樣本的處理對于Elisa 實(shí)驗(yàn)的成功起著關(guān)鍵的作用。

組織樣本一般制成組織勻漿,處理方法如下:

(1) 使用干凈的工具解剖目標(biāo)組織,盡快置于冰上,以防被蛋白酶降解。(暫時(shí)不處理的組織,置于圓底微量離心管中,浸入液氮中速凍",在 -80℃ 下存儲(chǔ)樣品備用)

(2) 用預(yù)冷的 PBS 緩沖液(0.01MpH=7.4)洗滌組織去除殘留的血液,稱重后備用。若組織塊較大,需先剪碎。
(3)在冰上用研磨緩沖液(常用 PBS 緩沖液,但最好使用 50mM Tris+0.9%NaCL+0.1% SDS,PH 7.3。或者中等強(qiáng)度 RIPA 細(xì)胞裂解液,注意 RIPA 裂解液 PH 值需為 PH7.3,建議不要使用含 NP-40Triton X-100 和高濃度 DTT 的組分,會(huì)抑制抗原抗體反應(yīng)。)研磨組織勻漿(加入研磨緩沖液的體積取決于組織的重量。一般情況下,每 1 克組織碎片應(yīng)使用 9ml 研磨緩沖液。另外建議在研磨緩沖液中加入一些蛋白酶抑制劑,如1mM PMSF)。得到的勻漿液可再利用超聲破碎或反復(fù)凍融進(jìn)一步處理(超聲破碎過程中,需冰浴降溫;反復(fù)凍融法可重復(fù) 2次)。
(4)將制備好的勻漿液于 5000×g 離心 5 分鐘,留取上清即可檢測。或分裝凍存于-20℃-80℃
(5)根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要,組織勻漿樣本可先定量總蛋白,以便于統(tǒng)計(jì)分析數(shù)據(jù),一般調(diào)整總蛋白濃度至 1-3mg/ml。某些組織樣本,如肝臟,腎臟,胰腺因含有較高濃度的內(nèi)源性過氧物酶, 在樣品濃度較高的情況下會(huì)和試劑盒底物反應(yīng)出現(xiàn)假陽性。
項(xiàng):
若為皮膚組織,離心后,需去除上層脂肪,以及下層沉淀,取中間層樣本用于檢測。

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